养阴清嗝颗粒的质量标准研究

【摘要】目的：研究养阴清嗝颗粒的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法对颗粒中黄芪、甘草进行定性鉴别，并用高效液相色谱法对颗粒中的金银花进行含量测定。结果：薄层色谱分离清晰，阴性无干扰。绿原酸在 0.342-3.420μg 范围内呈良好的线性关系。平均加样回收率为 99.00%，RSD 1.62% (n = 6)。结论：该方法专属性强，灵敏度高，重复性好，可用于该颗粒的质量控制。
【关键词】养阴清嗝颗粒；薄层色谱法；绿原酸；HPLC
Quality standard for Yangyinqingge Granules
Zhao Rui   Jiang Lei
(Dept of Pharmacy;The Traditional Hospital of Luan;Anhui Luan 237000)
ABSTRACT: Objective To establish the quality standard for Yangyinqingge Granules. Methods Radix Astragali and Glycyrrhizae Radix etRhizoma were identified by TLC. The content of chlorogenic acid was determinated by HPLC. Results The established identification methods were proper and reflecting a good specificity.The experiment showed good linear relationship at the ranges of 0.342-3.420μg for chlorogenic acid. The average recovery rare of chlorogenic acid was 99.00% ,RSD was 1.62% ( n = 6 ). Conclusion  The established methods
are not only practical but capable of effectively controlling the quality of Yangyinqingge Granules．
Key words: Yangyinqingge Granules；TLC；Chlorogenic acid ；HPLC
养阴清嗝颗粒是我院的医院制剂，由金银花、芦根、黄芪、白及、甘草等组成，适用于放射性食管炎表现为气阴两虚，或气虚血瘀，或毒伤血络，淤血内阻，甚则热壅肉腐等证。本实验对养阴清嗝颗粒中的组方药材黄芪、甘草建立了专属性强的薄层鉴别方法，对君药金银花的主要有效成分绿原酸进行了定量控制，建立了养阴清嗝颗粒的质量控制方法。
1、          仪器与试药
Agilent 1200 高效液相色谱仪（自动进样系统），紫外检测器，Sartorius BT125D电子天平，KQ5200DA超声仪，CAMAG紫外观察箱，YOKO-XR薄层加热器
    黄芪甲苷对照品(北京上立方联合化工技术研究院，20111205)，甘草对照药材(中国药品生物制品检定所，120904-201117)，绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，110753-200413)，甲醇(色谱纯) ，水为双重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2、          方法与结果
2.1 黄芪的薄层鉴别^[1,2]
取本品3g，加水30mL，沸水浴30min，超声30min，过滤，滤液用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用1%NaOH洗涤3次，每次20mL，再用正丁醇饱和的水洗涤3次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇定容至1mL，作为供试品溶液。另取不含黄芪的阴性样品同法制得阴性对照品溶液。再取黄芪甲苷对照品，用甲醇制成1 mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验(中国药典2010年版一部附录ⅥB) ，吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(10:20: 10:5)10℃下放置的下层溶液为展开剂，展开、取出、晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，供试品溶液色谱中，在与对照品对应位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照品溶液无干扰。
2.2         甘草的薄层鉴别^[3,4]
取本品10g，加甲醇50 mL，加热回流1h，过滤，滤液蒸干，残渣加水30 mL溶解，用乙醚洗涤3次，每次30 mL，弃去乙醚液，水溶液蒸至近干，加甲醇10 mL溶解，过中性氧化铝柱（15g，100-200目），用40%甲醇150 mL洗脱，收集洗脱液，蒸至近干，加水30 mL溶解，用正丁醇提取3次，每次30 mL，合并正丁醇液，用水洗涤4次，每次40 mL，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇定容至2 mL。另取不含甘草的阴性样品同法制得阴性对照品溶液。再取甘草对照药材0.5g，同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法试验 (中国药典2010年版一部附录ⅥB)，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂，展开、取出、晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰，供试品溶液色谱中，在与对照品对应位置上，显相同颜色的黄色斑点，而阴性对照品溶液无干扰。
                                 
1    2    3                                       1    2    3
                                               
图1 黄芪薄层鉴别色谱图　　　　　　　图２甘草薄层鉴别色谱图
１．对照品溶液　　　　　　　　　　　　１．对照药材溶液
２．供试品溶液　　　　　　　　　　　　２．供试品溶液
３．阴性对照品溶液　　　　　　　　　　３．阴性对照品溶液
2.3         HPLC测定绿原酸^[5]
2.3.1色谱条件
色谱柱: 十八烷基硅烷键合硅胶柱 (150 mm×4.6 mm，5μm) ;
流动相: 甲醇-0.1%磷酸水溶液(13:87)；流速: 1.0 mL /min；检测
波长: 327 nm；柱温: 25 ℃。
2.3.2溶液制备
称取本品5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇40 mL，超声30min，过滤，滤液用微孔滤膜(0.45μm) 滤过，即得供试品溶液。称取处方量除金银花外的方中药材，按制备工艺制得空白样品，再按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。取绿原酸对照品适量，精密称定，用50%甲醇制成1 mL含0.171mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3.3方法学考察
阴性干扰试验
吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液各10μL，按上述色谱条件测定。结果供试品溶液与对照品溶液在相同时间处有相同的色谱峰出现，阴性对照品溶液无干扰。见图3。
                       A
                       B
           C
图3 食管舒颗粒色谱
A 对照品；B 供试品；C 阴性
标准曲线制备
绿原酸对照品溶液分别进样2μL、4μL、8μL、12μL、16μL、20μL，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标（Y），以绿原酸的进样量（μg）为横坐标（X）绘制标准曲线，得回归方程Y=2511.30X+29.40（r=0.9999）。结果表明，绿原酸进样量在0.342μg-3.420μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。
精密度试验
精密吸取对照品溶液10μL连续进样6次，测定峰面积。结果对照品溶液的RSD = 0.05% ( n =6 ) ，表明仪器精密度良好。
稳定性试验
精密吸取供试品溶液10μL分别于0 h、2 h、4 h、8h、12h进样，测定峰面积。结果供试品溶液的RSD = 1.35% ( n =5 )，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。
重复性试验
取同一批号样品6份，按供试品溶液制备项下的方法处理，测定，绿原酸含量为1.900mg /g，RSD 为1.13%。
加样回收试验
精密称取绿原酸对照品适量，加入到已知含量的6份样品中，依法测定，计算加样回收率。结果见表1。
回收率% =（测得量-样品含量）/对照品加入量*%
表1   绿原酸加样回收试验结果（n=6）

样品量（g）	样品含量 （mg）	加入量（mg）	测定量 （mg）	回收率（%）	平均回收率（%）	RSD （%）
2.508	4.77	4.61	9.45	101.62	99.00	1.62
2.504	4.76	4.74	9.38	97.52
2.501	4.75	4.65	9.41	100.17
2.506	4.76	4.70	9.36	97.84
2.507	4.76	4.76	9.47	98.88
2.502	4.75	4.66	9.32	97.99

样品测定结果
取不同批号的样品，分别按前述供试品溶液制备法及色谱条件，测定，结果见表2。
表2 食管舒颗粒中绿原酸含量测定

批号	20120601	20120602	20120603
含量（mg/g）	1.886	1.920	1.890

 
3讨论
     在本制剂的薄层鉴别试验摸索中，对方中的其他药味均进行了试验条件摸索，但最终未能达到符合要求的结果，故只将黄芪和甘草列入定性鉴别中，实验证明，黄芪和甘草薄层鉴别的斑点清晰，重复性良好。
金银花为方中君药，为药典收载品种，成分清楚，其测定方法成熟，且其主要成分绿原酸的含量较高，并为处方中主要药效成分。因此对其确定为含量测定项，能有效的控制本颗粒的质量。在对样品的提取溶剂进行选择时，比较了100%甲醇、95%乙醇、50%甲醇，发现用50%甲醇进行提取时，色谱峰分离度好，基线平稳，且绿原酸提取充分。另外，由于绿原酸的稳定性差，样品应置于棕色容量瓶中，并于10℃以下保存。
参考文献
[1] 刘玉魁，余卫兵，刘燕娟.黄芪生脉口服液的质量控制[J].中国药师，2010,14(8):188-190.
[2] 赵艳普，李冬梅，冯丽，等.滑膜炎系列制剂的薄层色谱鉴别[J].中国药业，2011,20(22):52-53.
[3] 刘传统，祁红. 和中利胆口服液的质量标准[J].中国药师，2011，14(8):1228-1229.
[4] 郝甜媛，吴贵华，陈常青.香砂平胃丸质量控制[J].中草药，2010,43(2):308-311.
[5] 胡生俊，徐岳鑫，董赛文，等.高效液相色谱法测定复方金银花颗粒中绿原酸含量[J].中国药业，2011,20(3):23.


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